1 前言
试样经除去蛋白质后，以亚甲蓝作指示剂，在加热条件下滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液(已用还原糖标准溶液标定)，根据样品液消耗体积计算还原糖含量。
2 仪器与试剂
2.1 仪器
GT50全自动电位滴定仪，高温铂复合电极，10ml 滴定管单元，电陶炉
1.1 试剂
相关配制见附录。
盐酸溶液（1+1），碱性酒石酸铜甲液，碱性酒石酸铜乙液，乙酸锌溶液，亚铁氰化钾溶液(106g/L)，氢氧化钠溶液(40g/L)，葡萄糖标准溶液(1.0mg/mL)
2 实验方法
2.1 实验步骤
（1） 样品前处理
称取牛奶 25g，(精确至 0.001g)，移置 250mL 容量瓶中，加 50mL 水，缓慢加入乙酸锌溶液 5mL 和亚铁氰化钾溶液 5mL，加水至刻度，混匀，静置 30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，取后续滤液备用。
（1） 碱性酒石酸铜溶液的标定
吸取碱性酒石酸铜甲液 5.0mL 和碱性酒石酸铜乙液 5.0mL，置于滴定杯中。加水 10mL， 加入葡萄糖标准溶液 9mL，将电陶炉设为内环火 500℃，控制在 2min 中内加热至沸，然后调至 300℃，趁热以 1 滴/2s 的速度继续滴加葡萄糖标准溶液直至溶液蓝色刚好褪去为终点， 记录消耗葡萄糖的总体积，同时平行操作 3 份，取其平均值，计算每 10mL(碱性酒石酸甲、乙液各 5mL)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖(或其他还原糖)的质量(mg)。
（2） 试样溶液测定
吸取碱性酒石酸铜甲液 5.0mL 和碱性酒石酸铜乙液 5.0mL，置于滴定杯中，加水 10mL， 预先加入 2mL 的试样溶液至滴定杯中，控制在 2min 内加热至沸，保持沸腾继续以 1 滴/2s 的速度滴加试样溶液，滴定直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份， 得出平均消耗体积(V)。
1.1 参数设置
滴定模式： | 等量滴定 | 搅拌速度： | 1 |
电极平衡时间： | 2s | 预搅拌时间： | 5s |
电极平衡电位： | 1.5mv | 补液速度： | 5 |
最小添加体积： | 0.05mL | 预滴定添加体积： | 0.05mL |
结束体积： | 10mL | 预滴定后搅拌时间： | 5s |
电位突跃量： | 160 | 预控mv 值： | -320mv |
1 结果与讨论
1.1 实验结果
（1） 标定碱性酒石酸铜
编号 | 葡萄糖体积 （mL） | 还原糖含量 （mg） | 平均含量 （mg） |
1 | 10.200 | 10.200 | 10.233 |
2 | 10.200 | 10.200 |
3 | 10.300 | 10.300 |
（2） 试样溶液
编号 | 样品滴定体积 （mL） | 平均滴定体积 （mL） | 还原糖含量 （g/100g） | 平均含量 （g/100g） |
1 | 2.950 | 2.983 | 3.47 | 3.43 |
2 | 3.000 | 3.41 |
3 | 3.000 | 3.41 |
4 结论
国标中要求在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的
5%。根据实验数据得知，电位滴定仪对直接滴定法重复性良好。
参考文献
[1]GB 5009.7-2016 食品安全国家标准 食品中还原糖的测定[S].
注意事项
保持开启电陶炉 500℃的内环火，样品实际沸腾时间约为 90s。沸腾后调低为 300℃以防止暴沸。标定碱性酒石酸铜溶液应精确移取 9mL 葡萄糖溶液，可用电位滴定仪的手动滴定模式添加。
附录
1） 盐酸溶液(1+1)：量取盐酸50mL，加水50mL 混匀；
2） 碱性酒石酸铜甲液：称取无水硫酸铜2.4g 和亚甲蓝0.0125g，溶于水中，并稀释至250mL；
3） 碱性酒石酸铜乙液：称取酒石酸钾钠12.5g 和氢氧化钠18.75g，溶解于水中，再加入亚铁氰化钾1g，完全溶解后，用水定容至250mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶中；
4） 乙酸锌溶液：称取乙酸锌21.9g，加冰乙酸3mL，加水溶解并定容于100mL；
5） 亚铁氰化钾溶液(106g/L)：称取亚铁氰化钾10.6g，加水溶解并定容至100mL；
6） 氢氧化钠溶液(40g/L)：称取氢氧化钠4g，加水溶解后，放冷，并定容至100mL；
7） 葡萄糖标准溶液(1.0mg/mL)：准确称取经过98℃~100℃烘箱中干燥2h 后的葡萄糖0.5g， 加水溶解后加入盐酸溶液2.5mL，并用水定容至500mL。此溶液每毫升相当于1.0mg 葡萄糖。